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    Transnetyx 培養(yǎng)基相關(guān)問(wèn)題

    發(fā)布時(shí)間: 2023-04-20  點(diǎn)擊次數(shù): 1026次

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    文化媒體

    1.培養(yǎng)基(Neurobasic®/B27®/GutaMAX)有多長(zhǎng)™穩(wěn)定的

    我們的培養(yǎng)基在4攝氏度的黑暗中保存長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月。為了防止氧化,介質(zhì)可以等分成更小的體積,并在4攝氏度下儲(chǔ)存。

    2.我需要多長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行一次媒體交流?

    我們每34天更換1/2的培養(yǎng)基,但這在一定程度上取決于細(xì)胞密度。請(qǐng)參閱INVITROGENLTI)焦點(diǎn)16:6。如果細(xì)胞密度高于500/mm2,則每2天改變1/2

    3.NbActiv1NbActiv1有什么區(qū)別™ NbActiv4®

    NbActiv4®含有與NbActiv1相同的成分™ 加上固醇、雌激素和肌酸。NbActiv4®主要用作電生理介質(zhì)。

    4.在對(duì)海馬培養(yǎng)物進(jìn)行電鍍時(shí),通常在NbActiv1中添加25μM氨酸鹽™ Neurobasic®/B27®/谷氨胺最大殘留量™NbActiv4®Neurobasic®/B27®/GlustaMAX

    /固醇/雌激素/肌酸)培養(yǎng)至第4天。氨酸的用途是什么?

    它有助于海馬神經(jīng)元的發(fā)芽和提高生存能力。DIV4之后,應(yīng)使用不含氨酸的培養(yǎng)基進(jìn)行半培養(yǎng)基交換。

    5.如果氨酸鹽被排除在外,會(huì)有問(wèn)題嗎?

    DIV4時(shí),你的生存率會(huì)降低約30%

    6.如果我在NbActiv1中平板細(xì)胞™ 我可以將介質(zhì)更改為NbActiv4®嗎?

    是的,在文化中的任何時(shí)候,媒體都可以從NbAcitv1改變™ NbActiv4®。然而,事實(shí)并非如此。接種NbActiv4®的細(xì)胞不應(yīng)改為NbActiv1.

    7.我需要什么額外的用品來(lái)維持培養(yǎng)物?

    每份訂單包括足夠的培養(yǎng)基,可以開(kāi)始培養(yǎng)并維持45天。除此之外,您還需要更多的培養(yǎng)基,我們可以通過(guò)Invitrogen單獨(dú)提供完整的即用配方。您還需要您選擇的鍍膜玻璃或塑料基材,我們建議使用聚-D-賴氨酸作為基材。除此之外,您還需要解離溶液,我們推薦我們的木瓜蛋白酶和Hibernate®E-Ca以及火拋光移液管。我們將所有這些用品包含在我們的完整培養(yǎng)工具包中。

    8.我應(yīng)該在電鍍介質(zhì)中補(bǔ)充抗生素/抗真菌藥物嗎?例如:筆/鏈球菌/真菌唑還是大霉素?

    我們通常在沒(méi)有抗菌抗生素和抗真菌藥物的情況下進(jìn)行培養(yǎng),并取得了良好的成功。這有三個(gè)優(yōu)點(diǎn):

    首先,當(dāng)出現(xiàn)污染時(shí),更容易確定污染的來(lái)源。第二,如果你使用抗生素,當(dāng)你感染時(shí),很難擺脫。第三,抗生素已被證明可以激活神經(jīng)元中的癲癇樣爆發(fā)活動(dòng)。抗生素的使用是一種常見(jiàn)的做法,其類型和濃度取決于最終使用者。

    Hibernate®媒體

    Hibernate®、Neurobasic®B27®僅用于研究目的,由Invitrogen公司生產(chǎn)。Hibernate®、Neurobasic®B27®Invitrogen公司的商標(biāo)。

    1.Hibernate®媒體穩(wěn)定多長(zhǎng)時(shí)間?

    我們的Hibernate4攝氏度的黑暗中保存長(zhǎng)達(dá)1年。為了防止氧化,介質(zhì)可以等分成更小的體積,并在4攝氏度下儲(chǔ)存。

    2.你總是添加B27®GlutaMAX嗎™ Hibernate®,還是只在Hibernate®中保持細(xì)胞的活力?

    幾乎總是這樣。請(qǐng)參閱BrewerPrice1996PM:8856709的圖1。在37℃的環(huán)境二氧化碳中,Neurobasic®/B27®/Gutamax中的LD50 24小時(shí),而在Hibernate®/B27®/GutaMAX®中則超過(guò)3天。

    3.我們可以提供定制的Hibernate配方嗎?

    是的,我們可以提供Hibernate的自定義配方。

    4.Hibernate的其他用途包括:

    轉(zhuǎn)基因小鼠基因分型過(guò)程中的腦儲(chǔ)存。

    將腦組織運(yùn)送給合作者。

    基底

    1.我的神經(jīng)元更多地以細(xì)胞簇或團(tuán)塊的形式生長(zhǎng),而不是孤立的。怎么了?

    這意味著細(xì)胞與自身的粘附比與基質(zhì)的粘附更緊密。最有可能的問(wèn)題是基板制備不良。將您的方案與聚-D-賴氨酸的推薦制備和基質(zhì)涂層進(jìn)行比較。另一種可能性是鍍層密度可能過(guò)高。

    2.關(guān)于聚-L-賴氨酸與聚-D-賴氨酸,我認(rèn)為使用聚-D-賴氨酸是因?yàn)槿绻纸鉃橘嚢彼釙r(shí),D賴氨酸就不能被細(xì)胞使用。這是真的嗎?

    這就是理論。在一些早期研究中(Brain Res.494:651989)),我們發(fā)現(xiàn)差異不大。

    3.一些研究人員使用聚乙烯亞胺(PEI)代替聚-D-賴氨酸(PDL)。一個(gè)比另一個(gè)有優(yōu)勢(shì)嗎?

    PEIPDL便宜。我們?cè)?span>PEI方面沒(méi)有取得太大成功,但Mark Mattson在開(kāi)始在Neurobasic®/10%血清中培養(yǎng)后一直在使用它。報(bào)告顯示,神經(jīng)元存活率或刺突率沒(méi)有顯著差異。

    Soussou WV,Yoon GJBrinton RD,Berger TW2007)在表面處理的多電極陣列上培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)形態(tài)和電生理學(xué)。IEEE跨生物識(shí)別工程54:1309-1320。下午:17605362

    Brewer GJCotman CW1989)海馬神經(jīng)元在低密度特定培養(yǎng)基中的存活和生長(zhǎng):三明治培養(yǎng)技術(shù)或低氧的優(yōu)勢(shì)。腦研究494:65-74。下午:2765923

    預(yù)涂PDL培養(yǎng)皿

    1.你能推薦任何品牌的預(yù)涂層組織培養(yǎng)瓶或制備用于初級(jí)神經(jīng)元生長(zhǎng)的組織培養(yǎng)瓶的方法嗎?

    我們已經(jīng)確定,細(xì)胞培養(yǎng)塑料或玻璃上的聚-D-賴氨酸涂層在涂層后開(kāi)始失效。涂層玻璃片在14天后失效,涂層塑料在10天后失效。我們懷疑一些預(yù)涂板的工作效果令人滿意,但我們的經(jīng)驗(yàn)是,有幾種預(yù)涂板會(huì)導(dǎo)致初級(jí)神經(jīng)元的粘附性和存活率差。因此,我們建議您涂覆自己的基底,并在一周內(nèi)或上述幾天之后使用。

    2.你們銷售預(yù)涂文化用品嗎?

    是的,我們銷售PDL涂層燒瓶、井板和卡瓦。我們?cè)谝灰怪g給它們涂上涂層,第二天再發(fā)貨,以便隔夜送達(dá)。我們建議您在一周內(nèi)使用這些產(chǎn)品。

    新鮮紙巾

    1.你們提供什么年齡的紙巾?

    我們的標(biāo)準(zhǔn)組織是胚胎第18天或孕婦(3-4個(gè)月大)的成年組織。所有其他組織年齡均可特殊訂購(gòu),交貨期為2-3周。

    Wolburg H,Neuhaus J,Kniesel U,Krauss B,Schmid EM,Ocalan M,Farrell C,Risau W1994)血腦屏障內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)。組織培養(yǎng)、第二信使和共培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響?!都?xì)胞科學(xué)雜志》107(第5期):1347-1357頁(yè)。下午:1692329

    Risau W,Engelhardt B,Wekerle H1990)血腦屏障的免疫功能:

    大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白(自身)抗原。細(xì)胞生物學(xué)雜志110:1757-1766。下午:7929640關(guān)于從脊髓中分離運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的更多信息,M.DasJ.W.Rumsey、N.Bhargava、M.StancescuJ.J.Hickman。一種確定的神經(jīng)肌肉接頭的長(zhǎng)期體外組織工程模型。生物材料3118):4880-48882010。下午:20346499

    2.你保證每個(gè)小瓶有多少來(lái)自皮層和海馬體的神經(jīng)元?

    海馬神經(jīng)元的數(shù)量保證為100萬(wàn),皮層神經(jīng)元的數(shù)量則保證為200萬(wàn)。其他組織類型的數(shù)量不同。

    3.有什么保證可以保證動(dòng)物的大腦和脊髓組織是根據(jù)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院批準(zhǔn)的方案獲得的?

    我們的動(dòng)物方案233-08-013202074日獲得南伊利諾伊大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)的批準(zhǔn)。

    對(duì)于美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院的撥款,脊椎動(dòng)物部分:

    保證編號(hào)為A-3209-01。

    F.脊椎動(dòng)物

    用于原代培養(yǎng)的海馬、皮層和其他大腦和脊髓神經(jīng)元將從胚胎或出生后早期的大鼠或小鼠的大腦中獲得。使用氟烷麻醉后,將對(duì)大腦進(jìn)行解剖。戊比妥將用于大鼠的心臟。小鼠將在麻醉狀態(tài)下被送上斷頭臺(tái)或折斷頸部。這些樂(lè)死方法與美國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)樂(lè)死問(wèn)題小組的建議一致。

    通過(guò)從動(dòng)物身上分離神經(jīng)元,可以研究比整個(gè)動(dòng)物研究更多的實(shí)驗(yàn)變量,從而減少對(duì)動(dòng)物的需求。大鼠和老鼠的大腦是所有動(dòng)物大腦中研究得好的。

    平均住房需求估計(jì)為2天,足以讓嚙齒動(dòng)物從交通創(chuàng)傷中恢復(fù)過(guò)來(lái)。動(dòng)物將由SIUSM實(shí)驗(yàn)動(dòng)物醫(yī)學(xué)中心護(hù)理,該中心經(jīng)AALAC認(rèn)證,有10名工作人員,由Helen Valentine,D.V.M.MS指導(dǎo),經(jīng)DACLAM認(rèn)證

    使用氟烷麻醉后,將對(duì)大腦進(jìn)行解剖。戊比妥將用于大鼠的心臟。小鼠將在麻醉狀態(tài)下被送上斷頭臺(tái)或折斷頸部。這些樂(lè)死方法與美國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)樂(lè)死問(wèn)題小組的建議一致。因此,這些程序?qū)?dòng)物的使用限制在進(jìn)行有科學(xué)價(jià)值的研究時(shí)不可避免的范圍內(nèi),并將動(dòng)物的不適、痛苦和痛苦降至低。

     

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