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vmrd試劑盒-動物測試報告
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馬傳染性貧血
EIAV 測試規(guī)則對于美國客戶: VMRD，符合聯(lián)邦法規(guī)，將只運送 EIAV 測試包到美國農(nóng)業(yè)部批準的實驗室。在美國，EIAV 檢測試劑盒的銷售和使用僅限于經(jīng)州和聯(lián)邦(USDA)動物衛(wèi)生官員批準的實驗室。美國國家獸醫(yī)服務(wù)實驗室將定期提供編碼檢查試驗樣本，以評估美國農(nóng)業(yè)部批準的實驗室的能力。有關(guān)成為 EIAV 許可的檢測實驗室的問題，請與美國農(nóng)業(yè)部聯(lián)系。
血清有完整的分析證書，其中包括 AGID 中的反應(yīng)照片以及在 VMRD 實驗室中運行的 ELISA 反應(yīng)的光密度。這些參考血清是用于 EIA ELISA 檢測的質(zhì)量保證的參考樣品。
VMRD 的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測馬血清中的馬傳染性貧血病毒(EIAV)抗體。樣品血清 EIAV 抗體與包被在塑料孔上的重組 EIAV p26抗原結(jié)合。非特異性抗體被洗去，平板結(jié)合的 EIAV 特異性抗體捕獲 HRP- 重組 p26蛋白結(jié)合蛋白無 Fab 抗原結(jié)合位點。無界結(jié)合物被沖走，并且結(jié)合 HRP 標記抗原的存在是通過添加酶底物和隨后的藍色產(chǎn)品開發(fā)來檢測的。停止溶液的加入減緩了酶的反應(yīng)，并將產(chǎn)物的顏色從藍色變?yōu)辄S色。截止陽性對照提供了一個用于視覺讀取結(jié)果的顏色參考，以及一個用于用微板吸光度光譜儀讀取測定結(jié)果的光密度(OD)參考。黃色或 OD 等于或大于陽性對照表明樣品血清中存在 EIAVp26抗體。顏色或 OD 低于陽性對照表明沒有檢測到 EIAV p26的抗體。 VMRD 的 EIAV ELISA 是快速和方便的-總孵育時間只有35分鐘，沒有樣品稀釋，只有兩次洗滌-但它是高度特異和敏感的。 VMRD 的 ELISA 敏感性是相當(dāng)?shù)幕騼?yōu)于其他美國農(nóng)業(yè)部許可的 ELISA 滴定陽性樣品和檢測“弱樣品"
工具包程序概述
1.將50μl 樣品和對照轉(zhuǎn)移到抗原涂覆板2的細胞內(nèi)。在室溫下培養(yǎng)10分鐘3。洗一次，洗四次。加入50μl 抗原-過氧化物酶結(jié)合物5。在室溫下培養(yǎng)10分鐘6。洗四次，七次。加入50μl 基質(zhì)溶液8。在室溫下培養(yǎng)15分鐘9。加入50μl 停止溶液10。讀在450納米或眼睛
如果樣本產(chǎn)生的 OD 大于或等于陽性對照的平均值，則為陽性。如果樣本產(chǎn)生的 OD 小于陽性對照的平均值，則為陰性。為使試驗有效，正面控制的 OD 應(yīng)大于或等于負面控制的 OD 的1.5倍。負面控制的 OD 應(yīng)小于或等于0.15。為了測試是有效的時候閱讀的眼睛，積極控制應(yīng)該有可見的黃色和負面控制應(yīng)該有沒有或微弱的可見的顏色是小于積極控制。產(chǎn)生陽性檢測結(jié)果的樣品送交國家獸醫(yī)服務(wù)實驗室(NVSL)確認。
EIA 參考血清提供 EIA 陽性參考血清。這些馬來源血清含有一定水平的抗體，在 VMRD 的 EIA ELISA 中呈強、中或弱陽性反應(yīng)。每一小瓶血清都有一份完整的分析證書，其中包括在 AGID 中的反應(yīng)照片以及在 VMRD 實驗室中運行的 ELISA 反應(yīng)的光密度。這些參考血清是用于 EIA ELISA 檢測的質(zhì)量保證的參考樣品。
關(guān)于藍舌病病毒藍舌病是一種傳染性的，非傳染性的，節(jié)肢動物傳播的，野生和家養(yǎng)反芻動物的病毒性疾病。在牛通常是亞臨床感染，而在綿羊通常以急性卡他性粘膜炎癥和冠狀帶充血為特征。骨骼和冠狀動脈肌肉存在退行性改變，導(dǎo)致虛弱、恢復(fù)期延長和重大經(jīng)濟損失。藍舌病毒(BTV)屬于眼病毒屬，呼腸孤病毒科。藍舌病的實驗室診斷主要是通過分離病毒來確定的。病毒在 Vero 或 BHK 21細胞中分離出來，其存在通過免疫熒光證實。診斷這種疾病的血清學(xué)方法有 AGID、 ELISA、 cELISA 和免疫熒光。陽性結(jié)果證實暴露于 BTV，但不一定是攜帶者狀態(tài)。
VMRD 的藍舌病毒 cELISA v2VMRD 的競爭性酶聯(lián)免疫吸附測定(cELISA)檢測反芻動物血清中的藍舌病毒抗體。它已經(jīng)被證明可以檢測所有24種已知的藍舌病毒血清型(BTV) ，而不能檢測血清型1或2的獸疫出血癥病毒(EHDV)抗體。與幾項研究中的各種基準相比，該試劑盒顯示出好的敏感性和特異性。VMRD 的新 BTV cELISA v2檢測試劑盒提供了與原始版本(總孵育時間40分鐘)相同的快速和方便的特性，以及包括蒸餾水清洗在內(nèi)的新特性。美國農(nóng)業(yè)部批準的18個月的保質(zhì)期進一步提高了這種價格有競爭力的檢測方法的經(jīng)濟性，也證明了試劑盒的穩(wěn)定性。 VMRD 的藍舌病毒 AGIDVMRD 的藍舌病毒瓊脂免疫擴散(AGID)試驗檢測到反芻動物血清中針對藍舌病毒的沉淀抗體。還檢測到流行性出血病病毒(EHDV)的抗體。如果檢測結(jié)果呈陽性，則檢測血清將形成一條與參考線融合的線，或者導(dǎo)致陽性參考線在檢測血清附近向內(nèi)偏移而不形成可見線。否定不會形成一條線，也不會造成正參考線的偏離。
CAEV 的研究在 VMRD 有著悠久的歷史。VMRD 的主席斯科特 · 亞當(dāng)斯是最初分離 CAEV 并在20世紀70年代末和80年代初表征該病及其控制的研究小組的成員。VMRD 競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗(cELISA)已被批準用于羊血清中檢測山羊關(guān)節(jié)炎腦炎病毒(CAEV)抗體和綿羊進行性肺炎病毒(OPPV)抗體。我們的小型反芻動物慢病毒(SRLV) cELISA 測試了由山羊脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞融合衍生的專有異種單克隆抗體，其具有用于 cELISA 的優(yōu)異特征。這種抗體與 HRP 結(jié)合，用于與血清抗體競爭與微滴度板結(jié)合的抗原。除了這里總結(jié)的驗證研究之外，還證實了 VMRD 的 SRLV cELISA 檢測試劑盒的*質(zhì)量。1關(guān)于 CAE 和 OPPCAE 和 OPP (也稱為 maedi-visna)分別是山羊和綿羊的持續(xù)慢病毒感染。分子分析表明，這些病毒非常相似，它們常被歸類為小反芻動物慢病毒(SRLV)。多發(fā)性關(guān)節(jié)炎是 CAEV 感染的主要臨床表現(xiàn)，而 OPP 典型表現(xiàn)為進行性肺炎引起的呼吸困難和消瘦。大多數(shù)感染 SRLV 的綿羊和山羊沒有表現(xiàn)出臨床疾病，但仍然是該病毒的持續(xù)攜帶者。病毒傳播的主要方式是垂直通過牛奶和初乳。呼吸道分泌物和糞便也是感染性病毒的溫床。在可靠的診斷工具的支持下，良好的管理實踐是控制疾病傳播的最佳手段。參考文獻1 L.M. 的赫爾曼等人說: “用于檢測血清抗體山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒的競爭抑制酶聯(lián)免疫吸附試驗: 成功除的診斷工具。"克林。Diagn.實驗室。免疫系統(tǒng)。
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